首页  > 专题中心
专题中心

基因魔剪—CRISPR/Cas9系统(二)

能够方便而精确的对DNA和核苷酸序列进行编辑,是科研工作者们长期以来的梦想。CRISPR/Cas9系统的诞生和成熟标志这这一梦想逐渐变为现实。CRISPR/Cas9系统,作为第三代基因编辑技术,它的本质其实是细菌中一种对付诸如噬菌体等外来DNA的主动防御机制。此系统的工作原理是通过成簇的、规律间隔的短回文重复序列的crRNA( CRISPR-derived RNA )通过碱基配对与 tracrRNA (trans-activating RNA )结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物,此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计这两种 RNA,可以改造形成具有引导作用的sgRNA (short guide RNA ),足以引导 Cas9 对 DNA 的定点切割,从而进行基因敲出等操作。本期小优专题之CRISPR/Cas9篇的第二部分将为您带来CRISPR/Cas9系统最为广泛的应用—基因敲除,以及优宁维中为您提供的相关产品与服务。

 

1.CRISPR/Cas9敲除质粒产品(产品链接
产品说明(1):
 ①20 μg,可做20个转染体系;
 ②CRISPR/Cas9敲除质粒是一个包含三种编码Cas9核酸酶以及目标特异性的20 nt的向导RNA的质粒组成的,力求达到最高的敲除效率;
gRNA序列由GeCKO(v2)数据库设计,引导Cas9蛋白对目标基因组DNA进行位点特异性的切割,产生双链断裂;
CRISPR/Cas9敲除质粒支持人与小鼠的基因敲除应用,产品分别用名称后面的(h)与(m)标记区分;
提供纯化的质粒,可以直接进行转染实验。

图1. CRISPR/Cas9敲除质粒工作原理示意图
 
产品说明(2):Dharmacon sgRNA和Cas9核酸酶产品
sgRNA和Cas9核酸酶表达质粒分为两个载体,保证一个良好的转染效率。其中sgRNA以甘油菌形式提供,可以反复的培养和提取,为永生型sgRNA。crRNA和tracrRNA以寡核苷酸形式提供,操作简单,转染效率高。
 
 
 
Cas9核酸酶分为三种产品:
Edit-R SMARTCas9 核酸酶表达质粒:提供多达6中不同启动子,整合mKate2 荧光报告基因或puromycin抗性基因,以便于富集Cas9细胞。
 
 

BlastR-Cas9核酸酶表达质粒和慢病毒载体Cas9质粒/慢病毒颗粒:
 

Cas9 mRNA产品和Edit-R Cas9(NLS)核酸酶的活性蛋白
Dharmacon Cas9表达质粒及质粒专用转染试剂货号:

产品编号

产品名称

产品规格

U-004600-120

Edit-R Cas9 表达质粒

120ug

U-003000-120

Edit-R mKate Cas9表达质粒

120ug

U-001000-120

Edit-R CRISPR-Cas9 Nuclease表达质粒

120ug

CAS10141

Edit-R Lentiviral Blast-Cas9 Nuclease 质粒

10ug

CAS11229

Edit-R Inducible Lentiviral hEF1a-Blast-Cas9 Nuclease 质粒 DNA

10ug

CAS11877

Edit-R Lentiviral Fluorescent Cas9 Nuclease质粒 DNA

10ug

CAS11860

Edit-R Fluorescent Cas9 Nuclease mRNA

20 μg

CAS11728

Edit-R Cas9 Nuclease protein NLS

250 pmol

T-2006-01

质粒专用转染试剂

1ml

CRISPR Guide RNA

http://dharmacon.horizondiscovery.com/gene-editing/crispr-cas9/crispr-guide-rna/?rdr=true&LangType=2052&pageid=2147486260

EA

sgRNA Non-targeting Controls

http://dharmacon.horizondiscovery.com/gene-editing/crispr-cas9/crispr-controls/edit-r-lentiviral-sgrna-non-targeting-controls/?rdr=true&LangType=2052&id=2147486227

EA

sgRNA Positive Controls

http://dharmacon.horizondiscovery.com/gene-editing/crispr-cas9/crispr-controls/edit-r-lentiviral-sgrna-positive-controls/?rdr=true&LangType=2052&id=2147486229

EA

其他相关产品:

产品编号

产品名称

产品用途

产品规格

130-107-679

StemMACS Cas9 Nickase mRNA

特异性的基因敲除与基因编辑

EA

130-107-751

StemMACS Cas9 Nuclease mRNA

特异性的基因敲除与基因编辑

EA

产品链接

Ca9抗体

Cas9蛋白抗体

EA

产品链接

相应基因蛋白抗体

对照抗体,蛋白表达检测

EA

产品链接

转染试剂

CRISPR/Cas9质粒转染

EA

sc-108062

Plasmid Transfection Medium

质粒转染用培养基

20 ml

sc-418922

Control CRISPR/Cas9 Plasmid

阴性对照质粒(非特异性gRNA)

20 μg


2.同源重组修复(HDR)质粒(产品链接
①HDR质粒特点:
HDR质粒提供了一个特异性的DNA双链断裂修复模板,只能与CRISPR/Cas9敲除质粒共转染使用;
当与CRISPR/Cas9敲除质粒共转染时,HDR质粒包含一个嘌呤霉素抗性基因,方便筛选存在Cas9诱导的DNA剪切的细胞。
 
②产品说明:
20 μg,可做20个转染体系;靶向特异的HDR质粒需与CRISPR/Cas9敲除质粒共转染使用,针对相同种属与靶基因。HDR质粒包含2到3个质粒,每个都包含一段与CRISPR/Cas9质粒切除位点附近序列一致HDR修复模板;每一个HDR模板包含两条800bp的同源臂,特异性的结合到相应的Cas-9介导的DNA双链断裂位点上下游;每一个HDR质粒插入了一段嘌呤霉素抗性基因,来辅助筛选稳定敲除的细胞;每一个嘌呤霉素抗性基因两侧都加入了LoxP位点,方便后期通过Cre载体切除;HDR载体也包含红色荧光蛋白,方便观察确认转染效率;提供纯化的质粒DNA,可直接用于转染。

图2. HDR质粒工作原理示意图
 
产品说明(2):Dharmacon HDR产品

产品编号

产品名称

产品规格

UK-008100-01-10

Edit-R HDR Plasmid Donor Kit - EGFP

Kit

UK-008300-01-10

Edit-R HDR Plasmid Donor Kit - Universal

Kit

UK-008200-03-10

Edit-R HDR Plasmid Donor Kit - mKate2

Kit

UK-008100-02-10

Edit-R HDR plasmid backbone and insert - EGFP

Kit

UK-008200-04-10

Edit-R HDR plasmid backbone and insert - mKate2

Kit

其他相关产品:

产品编号

产品名称

产品用途

产品规格

产品链接

转染试剂

CRISPR/Cas9质粒转染

EA

sc-108062

Plasmid Transfection Medium

质粒转染用培养基

20 ml

产品链接

Puromycin dihydrochloride

筛选转染成功细胞

EA

产品链接

L-755,507

增强CRISPR介导的HDR作用

EA

 
 3.Cre载体(货号sc-418923
 ①Cre载体特点:
 Cre载体表达Cre重组酶,一种噬菌体p1酶,能够催化两个LoxP位点间的DNA重组;
当CRISPR/Cas9敲除质粒与HDR质粒共转染后,包含编辑过的DNA的细胞可以被在HDR修复过程中插入的特异性标志物筛选出来;
在选择出来之后,细胞可以转染Cre质粒,将在HDR过程中插入进去的遗传物质切除掉,比如插入的嘌呤霉素抗性基因等。
 
②产品说明:
20 μg,可做20个转染体系;推荐用于对被筛选出的成功由CRISPR/Cas9敲除质粒与HDR质粒进行过基因编辑锅的细胞;提供纯化过的质粒,可直接用于转染。

图3. Cre载体工作原理示意图
其他相关产品:

产品编号

产品名称

产品用途

产品规格

产品链接

转染试剂

CRISPR/Cas9质粒转染

EA

sc-108062

Plasmid Transfection Medium

质粒转染用培养基

20 ml


 4.双切口酶质粒(产品链接
 ①产品说明:
 20 μg,可做20个转染体系;双切口酶质粒包括一对各自编码了一个带有D10A突变的Cas9核酸酶和一个20 nt向导RNA(gRNA)的质粒,在敲除目的基因时相对于CRISPR/Cas9敲除质粒具有更高的特异性;
 
一对gRNA序列识别位点彼此偏移大约20个碱基左右,特异性的Cas9调节的双切口酶对DNA进行切割,模拟基因组DNA的双链断裂;一对质粒其中一个含有嘌呤霉素抗性基因,方便药物筛选,而另一个质粒含有GFP标记物,方便观察确认转染效率;双切口酶系统支持人类与小鼠基因敲除应用,产品分别用名称后面的(h)与(m)标记区分;
提供纯化的质粒,可直接用于转染。

图4. 双切口酶工作原理示意图
相关产品:

产品编号

产品名称

产品用途

产品规格

产品链接

相应基因蛋白抗体

对照抗体,蛋白表达检测

EA

产品链接

转染试剂

CRISPR/Cas9质粒转染

EA

sc-108062

Plasmid Transfection Medium

质粒转染用培养基

20 ml

产品链接

Puromycin dihydrochloride

筛选转染成功细胞

EA

sc-437281

Control Double Nickase Plasmid

阴性对照质粒(非特异性gRNA)

20 μg


高效的基因编辑离不开高效的sgRNA和优秀的Cas9蛋白,Dharmacon Edit-R CRISPR-Cas9 系统通过提供可直接转染的预制DNA和RNA,极大地简化了基因编辑的工作流程。
 
Dharmacon™ Edit-R――基因编辑系统分为三个部分:
同时还可以选择甘油菌形式的sgRNA和Cas9质粒,保证实验的连续性!
       
以上就是小优为您介绍的CRISPR/Cas9在基因敲除应用中涉及的产品,不知道大家是不是对利用CRISPR/Cas9这把锋利的“基因魔剪”进行基因编辑更加有信心了呢?科研路上,小优陪伴,优质产品,助力科研。

上海优宁维生物科技股份有限公司

抗体专家 | 流式专家 | 免疫组化专家 | 实验服务专家 | 科学仪器

免费热线:4008-168-068 

咨询邮箱:info@univ-bio.com      

网站:www.univ-bio.com

微信公众平台:优宁维抗体专家,欢迎关注!

优宁维抗体专家.gif

上海优宁维生物科技股份有限公司

试剂 | 耗材 | 仪器 | 软件 | 定制 | 实验服务 | 供应链

免费热线:4008-168-068

咨询邮箱:info@univ-bio.com

订购商城:www.univ-bio.com

微信公众平台:优宁维抗体专家,欢迎关注!

小优博士(小程序):5大课堂, 让你的科研不再难!

公众号
小程序